「助研大礼包」CCK8试剂盒免费领啦！_生物资讯

「助研大礼包」CCK8试剂盒免费领啦！

点击次数：126次发布时间：2025/3/12 9:44:49

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一 实验原理

CCK-8(Cell Counting Kit-8)是一种基于水溶性四唑盐(WST-8)的高灵敏度细胞活性检测方法.其核心原理是：活细胞线粒体内的脱氢酶可将WST-8还原为橙黄色甲臜(Formazan),生成的甲臜量与活细胞数量成正比.通过检测450nm波长下的吸光度(OD值),可间接反映细胞增殖或毒性状态.相较于传统MTT法,CCK-8无需溶解步骤毒性低且灵敏度更高(可检测低至1000个细胞).

二实验步骤详解

在CCK-8增殖实验中,精确的实验步骤是获取可靠结果的关键.下面我们详细讨论实验的核心步骤：

细胞种植处理细胞并确定合适的种植密度.通常,细胞需要在无菌条件下传代,使用含有适当抗生素的培养基以防污染.

种植密度应根据细胞类型和实验设计调整,确保细胞在实验过程中能达到适宜的生长状态.一般推荐在每个孔中种植数千至数万细胞,具体数字根据细胞的生长速率和实验的持续时间而定.

添加CCK-8试剂实验的下一步是添加CCK-8试剂.

在添加前,先按照说明书推荐的比例对试剂进行稀释.

添加量通常是根据培养板孔的体积而定,例如,每个96孔板的孔中添加10微升试剂.添加试剂后,将培养板轻轻晃动几次,以确保试剂与培养基充分混合.

然后将培养板放回细胞培养箱中,根据细胞类型,孵育时间通常在1到4小时之间.

观察与记录

在孵育期间,重要的是保持培养箱的条件稳定,并避免频繁打开以减少温度和湿度的波动.数据记录是实验中至关重要的一步.

从培养板中取出后,应立即使用酶标仪测量吸光度.记录每个孔的读数,注意任何异常值或可能的污染迹象.

三 数据处理与分析

在CCK-8实验中,数据处理与分析是揭示实验结果的关键步骤.以下是详细的分析流程：

数据的读取完成孵育后,使用酶标仪读取吸光度是第一步.确保酶标仪校准正确,设置适当的波长（通常为450 nm）.将培养板放置在仪器中,仪器将自动测量每个孔中的吸光度值.这些值反映了培养孔中细胞的活性,从而可以评估细胞的增殖情况.

数据分析获取吸光度数据后,下一步是计算细胞存活率.将实验组和对照组的平均吸光度值进行比较.细胞存活率可以通过以下公式计算：

（实验组吸光度 - 空白组吸光度）/（对照组吸光度 - 空白组吸光度）× 100%

使用图表软件如Excel或专业统计软件如GraphPad Prism,可以绘制出生长曲线,直观展示细胞增殖趋势.

结果解释分析数据时,重要的是评估实验结果的可靠性.检查数据是否有异常值,比如意外的吸光度高值或低值,这可能表明操作错误或污染.同时,确保重复实验的结果一致性.数据一致性高通常表示实验操作稳定,结果可靠.

另外,结果的生物学意义也需考虑,比如细胞反应是否符合预期的生物学行为.通过这些步骤,不仅可以保证数据处理的精确性,还能深入理解实验结果背后的生物学意义,为进一步的研究提供坚实的数据支持.

四 注意事项与常见问题

常见问题及解决方案

试剂稳定性：确保CCK-8试剂储存于推荐的条件下,通常是避光冷藏.使用前务必检查试剂是否有变色或沉淀现象,这可能影响实验结果的准确性.

细胞污染：操作中应始终保持无菌环境.使用无菌操作台和经过严格消毒的工具.如果发现细胞污染,应立即丢弃受污染的细胞,并彻底清洁所有设备和工作区域.

实验技巧分享

均匀添加试剂：添加CCK-8试剂时,使用多通道移液枪以保证每个孔中试剂量的一致性.轻轻晃动培养板,使试剂与培养基充分混合,避免产生气泡.

准确计时：设置明确的计时提醒,以确保所有孔的孵育时间一致,防止由于时间差异导致的数据偏差.

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