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科研-大鼠信号素5A（SEMA5A）定量检测试剂盒
| 反应种属 | 大鼠 |
| 检测范围 | 0.3125ng/mL-10ng/mL |
| 物理性能 | 试剂盒的各液体组分应澄清透明、无沉淀或者絮状物。微孔板铝箔袋应真空包装，无破损漏气。 |
| 用途 | 定量检测血清、血浆、细胞培养上清液等样本中大鼠信号素5A（SEMA5A）的浓度。 |
| 实验原理 | 本试剂盒采用双抗体夹心酶联免疫吸附试验（ELISA）。在预包被抗大鼠信号素5A（SEMA5A）抗体（固相抗体）的微孔酶标板中，加入大鼠信号素5A（SEMA5A）校准品和待测样本，再加入另一株 HRP 标记的抗大鼠信号素5A（SEMA5A）抗体（酶标抗体），经过温育与充分洗涤，去除未结合的组分，在微孔板固相表面形成固相抗体-抗原-酶标抗体的夹心复合物。加底物 A 和 B，底物在 HRP 催化下，产生蓝色产物，在终止液（2M 硫酸）作用下，最终转化为黄色，在酶标仪 450nm波长上测定吸光度（OD 值），吸光度（OD 值）与待测样品中大鼠信号素5A（SEMA5A）的浓度正相关。拟合校准品曲线，可以计算出样本中大鼠信号素5A（SEMA5A）的浓度。 |
| 特异性 | 本试剂盒识别天然和重组大鼠信号素5A（SEMA5A），与结构类似物无交叉。 |
| 重复性 | 板内变异系数均<10%，板间变异系数均<15%。 |
| 回收率 | 回收率在 85%-115%之间。 |
| 试验所需自备试验器材 | 1、酶标仪（450nm）2、精密移液器及一次性吸头3、蒸馏水4、洗瓶或者自动洗板机5、37℃水浴锅或恒温箱6、500ml 量筒 |
| 操作程序 | 所有试剂和组分都先恢复到室温，标准品、质控品和样品，建议做复孔。1、按前面说明书描述的方法，配制好试剂盒各种组分的工作液。2、从铝箔袋中取出所需板条，剩余的板条用自封袋密封放回冰箱。3、设置标准品孔、0 值孔、空白孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品 50μL，0 值孔加样本稀释液 50μL，空白孔不加，样本孔加待测样本 50μL。4、除空白孔外，标准品孔、0 值孔和样本孔，加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体 100μL。5、用封板膜盖住反应板，37℃水浴锅或恒温箱避光孵育 60min。6、揭开封板膜，弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置 20S，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复 5 次。若使用自动洗板机，请按洗板机操作程序进行洗板，添加浸泡 30s 的程序，可以提高检测的精度。洗板结束，加底物前，要在干净不掉屑的纸上，充分拍干反应板。7、将底物 A 和 B 按 1:1 体积充分混合，所有孔中加入底物混合液 100μL。用封板膜盖住反应板，37℃水浴锅或恒温箱避光孵育 15min。8、所有孔加入终止液 50μL，在酶标仪 450nm 波长上读取各孔吸光度（OD 值）。 |
| 注意事项 | 1：如果试剂盒的组份需要再次使用，请确保上一次使用之后没有被污染。2：酶标板单次未使用完，要谨记密封放到 2-8℃保存。 |
| 问题分析 | ①问题描述：标准曲线差可能原因及相应对策：1.试剂盒平衡时间不够——不低于 2 个小时的室温平衡2.吸取及洗涤不充分——充分的吸取及洗涤3.移液不精确——检查和校正移液器②问题描述：精密度低可能原因及相应对策：1.洗涤不充分——按说明书要求充分洗涤和浸泡2.混匀不充分和吸取试剂不足——充分混匀和吸取试剂3.重复利用吸头、容器和覆膜——使用加样器要更换新的吸头、使用新的封板模4.加样不精确——检查和校正移液器③问题描述：O.D值低可能原因及相应对策：1.每孔加的试剂量不精确——校正移液器，精确加入试剂2.温育时间不正确——保证充足的温育时间3.温育温度不正确——试剂要平衡至室温并保证准确的温育温度4.酶标记物或底物失效——通过混合酶标记物和底物，颜色迅速显现来检查5.没有加入终止液——按照说明书实验操作步骤加入终止液6.超出读数时间读数——在说明书推荐的读数时间内读数④问题描述：样本值可能原因及相应对策：1.不正确的样本储存方式——正确储存样本，使用新鲜样本进行实验2.不正确的样本收集和处理方法——采取正确的样本收集和处理方法3.待测物质在样本中含量低——使用新鲜样本，重复实验 |
| 声明 | 该试剂盒仅供研究使用，如将其用于临床诊断或任何其他用途，我公司将不对因此产生的问题负责，亦不承担任何法律责任。 |
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