反应种属 | 通用种属 |
检测范围 | 6.25 ug/mL-100 ug/mL |
物理性能 | 试剂盒的各液体组分应澄清透明、无沉淀或者絮状物。微孔板铝箔袋应真空包装,无破损漏气。 |
用途 | 用于检测血清、血浆、细胞培养上清液等样本中β-羟丁酸(bHB)的浓度。 |
实验原理 | 试剂盒采用酶联免疫分析方法。采用生物素标记β-羟丁酸(bHB),纯化的抗β-羟丁酸(bHB)抗体包 被微孔板,在竞争抑制反应中,一定量的固相抗体与生物素标记β-羟丁酸(bHB)及非标记抗原(校 准品或标本)进行抑制竞争反应,抗体与生物素标记的β-羟丁酸(bHB)结合量受非标记抗原量所 抑制,非标记抗原量多,抗体与生物素标记的β-羟丁酸(bHB)结合就少,反之结合就多;反应平衡 后,形成固相抗体-生物素化β-羟丁酸(bHB),再加入酶标记的亲和素,形成固相抗体-生物素化β-羟丁酸(bHB)-酶标-亲合素复合物。经加底物显色后,用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD 值)。随着β-羟丁酸(bHB)浓度的升高,OD值逐渐下降呈良好的线性关系。本试剂盒具有灵敏度 高、特异性强、重复性好、操作简单、快速等特点,对样本中β-羟丁酸(bHB)的减少或升高有可 靠的检出性能。 |
特异性 | 本试剂盒识别天然和重组β-羟丁酸(bHB),与结构类似物无交叉。 |
重复性 | 批内变异系数 CV%小于 15%,批间变异系数 CV%小于 15%。 |
回收率 | 回收率在 85%-115%之间 |
试验所需自备试验器材 | 1、酶标仪(450nm) 2、精密移液器及一次性吸头 3、蒸馏水 4、洗瓶或者自动洗板机 5、37℃水浴锅或恒温箱 6、500ml 量筒 |
操作程序 | 1. 将各种试剂移至室温平衡两小时,取浓缩洗涤液,根据当批检测数量,用蒸馏水 1:20 稀释,混匀后备用。 2. 将预包被板从密封袋中取出,设一个空白对照孔,不加任何液体;每个校准品设 2 孔,每孔加入对应校准品 50μl;其余每个检测孔直接加待测血清或质控品 50μl。 3. 除空白孔外所有孔加入生物素化抗原 50μl,混匀,贴上封板膜,置 37℃温育 60 分钟。 4. 手工洗板:弃去孔内液体,洗涤液注满各孔,静置 10 秒甩干,重复 3 次后拍干。洗板机洗板:选择洗涤 3 次程序洗板后拍干。 5. 每孔加入酶标亲合素 50μl(空白对照孔除外),混匀,贴上封板膜,置 37℃温育 30 分钟。 6. 手工洗板:弃去孔内液体,洗涤液注满各孔,静置 10 秒甩干,重复 3 次后拍干。洗板机洗板:选择洗涤 3 次程序洗板后拍干。 7. 每孔加显色剂 A 50μl,显色剂 B 50μl,振荡混匀后,置 37℃避光显色 15 分钟,每孔加终止液 50μl。 用酶标仪读数,取波长450nm,先用空白对照孔调零点,然后测定各孔光密度值(OD值)。 |
注意事项 | 1:如果试剂盒的组份需要再次使用,请确保上一次使用之后没有被污染。 2:酶标板单次未使用完,要谨记密封放到 2-8℃保存。 |
问题分析 | ①问题描述:标准曲线差 可能原因及相应对策: 1.试剂盒平衡时间不够——不低于 2 个小时的室温平衡 2.吸取及洗涤不充分——充分的吸取及洗涤 3.移液不精确——检查和校正移液器 ②问题描述:精密度低 可能原因及相应对策: 1.洗涤不充分——按说明书要求充分洗涤和浸泡 2.混匀不充分和吸取试剂不足——充分混匀和吸取试剂 3.重复利用吸头、容器和覆膜——使用加样器要更换新的吸头、使用新的封板模 4.加样不精确——检查和校正移液器 ③问题描述:O.D值低 可能原因及相应对策: 1.每孔加的试剂量不精确——校正移液器,精确加入试剂 2.温育时间不正确——保证充足的温育时间 3.温育温度不正确——试剂要平衡至室温并保证准确的温育温度 4.酶标记物或底物失效——通过混合酶标记物和底物,颜色迅速显现来检查 5.没有加入终止液——按照说明书实验操作步骤加入终止液 6.超出读数时间读数——在说明书推荐的读数时间内读数 ④问题描述:样本值 可能原因及相应对策: 1.不正确的样本储存方式——正确储存样本,使用新鲜样本进行实验 2.不正确的样本收集和处理方法——采取正确的样本收集和处理方法 3.待测物质在样本中含量低——使用新鲜样本,重复实验 |
声明 | 该试剂盒仅供研究使用,如将其用于临床诊断或任何其他用途,我公司将不对因此产生的问题负责,亦不承担任何法律责任。 |
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